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2019年12月以來，新型冠狀肺炎疫情仍在肆虐。國家對新型冠狀肺炎以及相關(guān)的病媒生物威脅公共安全加大投入力度，各地疾控中心也開始病媒生物研究篩選預(yù)防工作。在我國法定報告的傳染病中有許多屬于病媒生物性傳染病，如鼠疫、流行性出血熱、鉤端螺旋體病、瘧疾、登革熱、地方性斑疹傷寒、絲蟲病等；而一些消化道傳染病則通過病媒生物的機(jī)械性傳播在人群中擴(kuò)散，如痢疾、傷寒等。

病媒生物性傳染病是人類共同面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)之一。通過對病媒生物的有效控制，可以減少它們對人群的騷擾和經(jīng)濟(jì)損失，更可以預(yù)防和控制病媒生物性傳染病的發(fā)生和傳播。加強(qiáng)病媒生物疾病預(yù)防控制已成為一個迫切的任務(wù)。安徽省疾病預(yù)防控制中心毒理科做病媒生物實(shí)驗(yàn)時，就使用上海凈信冷凍研磨儀。

實(shí)驗(yàn)背景：鼠類不僅傳播鼠疫、流行性出血熱、鉤端螺旋體病、斑疹傷寒等多種疾病，嚴(yán)重危害人類健康;而 且通過嚙咬、盜食、污染等方式給工業(yè)、農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)等造成直接或間接的經(jīng)濟(jì)損失。

一、材料和方法：

樣品來源于居民區(qū)及收治醫(yī)院周 圍 環(huán) 境 采 集 目 標(biāo) 病 媒 生 物。160份鼠肺樣品來自本地，15份蜚蠊體表擦拭子來自安徽等地。所有樣品均凍存于-80攝氏度待檢。

二、儀器及試劑：

1、上海凈信冷凍研磨儀

2、熒光定量PCR分析儀

3、高效病毒濃縮試劑盒

4、巢式RT-PCR所采用的引物,一步法RT-PCR試劑盒

5、RNA提取試劑盒

三、 實(shí)驗(yàn)方法

1、樣品RNA的提取 別取待檢鼠肺組織于全自動樣品冷凍研磨儀充分再加入異硫酸氰胍溶液，充分溶解后于-20℃保存，備蜚蠊體表擦拭子中加入無菌生理鹽水少許于4℃中過夜，擠壓后取出棉拭子，將剩余液體離心5min，其上清液則用高效病毒濃縮試劑盒進(jìn)行濃縮，濃縮所得的晶體中再加入異硫酸氰胍溶液，充分溶解后于-20℃保存?zhèn)溆?，按照試劑盒的說明 從樣品的異硫酸氰胍溶液中提取提取所得的RNA保存?zhèn)溆谩?/p>

樣品研磨前后

實(shí)驗(yàn)步驟：

1、準(zhǔn)備全自動樣品冷凍研磨儀。

2、金屬適配器，以及鋼珠適配器。

3、將老鼠組織剪碎，放入研磨管，加入鋼珠。

4、將適配器裝入凈信研磨儀中，開啟低溫功能保持溫度。

5、設(shè)定參數(shù)，啟動儀器至研磨程序結(jié)束，可得到如圖所示樣品。

儀器介紹：

上海凈信JXFSTPRP-CLN冷凍研磨儀是一種快速、高效、制冷的研磨系統(tǒng)。它能在非常短的時間內(nèi)將土壤、植物和動物的組織/器官、細(xì)菌、酵母、真菌、孢子、古生物標(biāo)本等樣品完成研磨、粉碎、混合機(jī)細(xì)胞破壁。廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)藥、生化、環(huán)境、地質(zhì)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、質(zhì)檢、材料等領(lǐng)域。