在細胞生物學、肝臟疾病機制研究等領域，高質量的小鼠肝臟單細胞懸液是開展后續(xù)流式分析、單細胞測序、細胞功能實驗的核心前提。傳統(tǒng)手動制備方法常面臨諸多難題：消化酶作用不均導致細胞解離不徹底，反復操作中細胞活性易受溫度影響下降，且人工研磨、過濾步驟繁瑣，難以保證批次間的一致性。這些問題不僅拖慢實驗進度，還可能因樣本質量不穩(wěn)定影響后續(xù)檢測數(shù)據(jù)的可靠性。而上海凈信單細胞懸液制備儀憑借標準化程序控制、精準溫控及自動化操作，為小鼠肝臟單細胞懸液制備提供了穩(wěn)定高效的解決方案，有效規(guī)避傳統(tǒng)方法的痛點。

實驗目的：小鼠肝臟制備成單細胞懸液，為后續(xù)流式細胞分析、單細胞測序、細胞功能檢測等實驗提供高活性、高純度的單細胞樣本，保障實驗數(shù)據(jù)的準確性與重復性。

實驗選用儀器：

單細胞懸液制備儀 JX-CKSM-4WK-B

實驗步驟：

1、連接儀器電源，打開開關，選好肝臟程序以備用。

2、消化酶和終止液提前用流動自來水解凍，讓其混合更加均勻。

3、小鼠斷頸處死后，取出肝臟部，放入有PBS的培養(yǎng)皿中，放在冰上。

將選取的肝臟組織用PBS洗滌后，用眼科剪剪碎、放入2ml消化管中，加入1ml左右消化酶。

5、放到模塊上，選擇對應程序，點擊運行開始。

6、時間結束后儀器自動停止。

7、用70um濾網(wǎng)過濾，加入終止液終止消化(消化液：終止液=1：1)

過濾后的懸液放到離心機上重懸、重懸后棄掉上清，加入2ml裂紅溶液(200ulFBS)，冰上裂紅(3-5分鐘)，然后加入500ulPBS+1ml碎片去除劑，離心后棄上清，然后洗細胞兩次。

最后加入少量無菌PBS打散混勻底部沉淀細胞，即可得到單細胞懸液。

9、OAPI進行染色，細胞計數(shù)儀看結果。

細胞計數(shù)儀結果圖

注意事項：

1、單細胞試劑盒要在-20℃低溫保存，使用時提前拿出來用涼水解凍，切記用溫熱水。

2、注意不要清洗單細胞懸液次數(shù)或時間太長，導致細胞損失。

3、上海凈信單細胞懸液制備儀讓肝臟樣本處理更省心

從本次小鼠肝臟單細胞懸液制備實驗來看，上海凈信單細胞懸液制備儀的優(yōu)勢尤為突出。相比傳統(tǒng)手動操作，儀器預設的肝臟專屬程序省去了反復調試參數(shù)的麻煩，操作人員只需按步驟放置樣本、啟動程序，即可實現(xiàn)消化酶的精準作用 —— 避免了人工控制消化時間、溫度導致的解離過度或不徹底問題。實驗中，從組織剪碎到儀器自動停止消化僅需常規(guī)步驟時長，且全程無需頻繁轉移樣本，最大程度減少了細胞在室溫下暴露的時間，為后續(xù)裂紅、清洗步驟保留了更多活細胞。

后續(xù)細胞計數(shù)儀結果也印證了儀器的可靠性：制備的單細胞懸液活率穩(wěn)定，細胞分散均勻，無明顯組織碎片殘留，完全滿足 OAPI 染色及后續(xù)實驗的要求。尤其值得一提的是，儀器操作門檻低，即使是剛接觸樣本制備的實驗人員，按照流程也能快速上手，有效降低了因操作經(jīng)驗差異導致的實驗誤差。

對于需要頻繁開展小鼠肝臟相關研究的實驗室來說，上海凈信單細胞懸液制備儀不僅是提升實驗效率的 “好幫手”，更是保障樣本質量穩(wěn)定性的 “定心丸”。它解決了傳統(tǒng)方法中 “耗時、費力、結果不穩(wěn)定” 的核心痛點，讓科研人員能將更多精力投入到后續(xù)的數(shù)據(jù)分析與機制探索中，為肝臟領域的研究提供了堅實的樣本制備支持。